NY∕T 3257-2018 水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程(农业)
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0.36 |
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7 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020,B 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3257一2018,水稻稻瘟病抗性室内离体叶片,鉴定技术规程,Technical code of practice for wounding inoculation of detached leaves for,evaluation of rice resistance to the blast fungus (Magnaporthe oryzae),2018-07-27 发布2018 - 12 - 01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,剧吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口,本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、中国农业大学,本标准主要起草人:赵文生、彭友良、杨普云、杨俊、朱晓明,NY/T 3257-2018,I,NY/ T 3257一2018,水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程,范围,本标准规定了水稻对稻瘟病抗性的室内离体叶片鉴定技术方法和评价标准,本标准适用于常规水稻资源、品种、品弃华幽国……iiOIá5J宰内鉴定和评价,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的,件。凡是不注日期的引,GB/ T 15790 稻,GB/ T 19557.7,3 术语和定义,下列,抗病性,植物体所,人工接种,在适宜条件,抗性评价,根据采用,接种体inoculum,能够侵染寄主并引,水稻稻瘟病the rice blast,由丝状真菌稻瘟病菌(有'1主态恤r.Jheoη zae ， 无出e gJ iculaηa oryzae) 引起的水稻,真菌病害。依据病害发生的时期和部位， 槽--冒了叶枕瘟、穗颈瘟、枝梗瘟、粒瘟和茎,节瘟,番茄燕麦培养基oat tomato agar,用于稻瘟病菌培养。称取40 g 燕麦片， 800 mL 水煮沸留滤液，加入1 5 0 mL番茄汁、1 5 g 琼脂粉,定容至1L ,4 病原物的采集、分离和保存,4. 1 病样采集,在待测水稻材料的适合种植地区或拟推广地区代表性地块种植普感品种丽江新团黑谷，种植全程,NY/T 3257-2018,不施用杀菌剂。在田间叶瘟发生期(一般为分囊期至抽穗扬花期) ，采集具有典型稻瘟病病斑的水稻,叶片,4. 2 病菌分离,剪取含有单个典型病斑的水稻叶段，浸水展开，经次氯酸铀消毒和无菌水漂洗之后，用灭菌滤纸,吸干叶段上的水，平铺于水琼脂板上。于28 0C 光照培养箱中约5 d ，可观察到稻瘟菌的元性繁殖体,(包括营养菌丝、分生抱子梗和分生抱子)。在体视显微镜下，用挑针挑取叶段上的稻瘟菌分生抱子,并置于含有四环素等抗生素的水琼脂板上， 28 0C 光照培养箱中培养。12 h~24 h 后，用挑针在体视显,微镜下挑取萌发的单个稻瘟菌分生抱子。含有单个稻瘟菌分生于包子的琼脂块要尽可能小，且背景干,净、元杂质,4. 3 病菌培养,将挑取的单个稻瘟菌分生抱子块转移至番茄燕麦培养基上，于28 0C 光照培养箱中培养， 3 d~5 d 后,可长出稻瘟菌菌落,4. 4 病菌保存,确认长出的稻瘟菌菌落生长良好，无杂菌污染。挑取菌落边缘的新生菌丝至贴有灭菌滤纸片的番,茄燕麦培养基上，于28 0C 光照培养箱中培养。待稻瘟菌菌落长满滤纸片(7 d~9 d) ，确认元杂菌污染,后，收集滤纸片于灭菌的硫酸纸袋内，编号，并于超净工作台内吹干。将装有稻瘟菌的硫酸纸袋放人灭,菌的信封内，于干燥器中干燥7 d~10 d; 然后放置于盛有硅胶干燥剂的塑料盒内，于-20 0C 冰箱中长期,保存。每个病斑只分离、保存1 个单抱菌株,5 水稻的种植与管理,根据需要称取适量的供试(待测)水稻种子，按常规方法种植水稻幼苗，待水稻生长至3 叶~7 叶龄,期用于接种,6 接种体的制备,稻瘟菌菌丝块或分生抱子悬浮液均可作为室内接种鉴定的接种体,6. 1 菌丝块,从冰箱中取出保存的滤纸片，平铺在番茄燕麦培养基的中央部位，于28 0C 光照培养箱中培养,5 d~7 d 后，用菌落边缘的菌丝块作为接种体。在番茄燕麦培养基上转接培养的菌丝块也可作为接,种体,6. 2 分生于包子悬浮液,6.2. 1 产抱,在番茄燕麦培养基上活化稻瘟菌，待其菌落直径长至接近培养基边缘时，在超净工作台内往培养皿,中加人适量元菌水润湿菌落，片刻后用无菌的涂菌环将菌丝打断成细小碎段，用移液器将菌丝液混匀,转移到新的厚番茄燕麦平板上(培养基厚度大于培养皿厚度的2 / 3) ，再用同一无菌涂菌环涂布均匀，吹,干，于28 0C 光照培养箱中培养1. 5d 或2 d 左右，待番茄燕麦平板上长出气生菌丝，加元菌水到培养皿,中;用棉签将培养基表面菌丝轻轻擦去，避免损伤培养基表面;用水将菌丝段冲洗干净、晾干，再用双层,纱布盖在培养皿上。28 0C 光照培养箱中培养2 d~3 d ，培养基表面即可生成大量的分生抱子,6.2. 2 制备抱子悬浮渡,在产抱培养皿上加人含O. 025 % Tween 20 的灭菌水，用玻璃洗菌棒将菌落表面形成的分生抱子洗,下，再用双层擦镜纸过滤分生抱子液至5mL EP 管中。充分混匀分生抱子液，用血球计数板测定袍子,浓度。重复测定3 次，取平均值。将分生抱子悬浮液浓度调至10 5 个抱子/ mL ，且保证菌液不少于,2mL。分生抱子悬浮液需现配现用,NY/T 3257-2018,离体叶片划伤接种,7. 1 叶片的准备,剪取充分展开心叶的中下部叶段(长度约为5 cm) ，用灭菌的昆虫针在叶正面、垂直于主叶脉制造,微创伤，每个叶段均匀分布3 个微创伤点，每个点长……
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